제어 라인
예방 접종으로 호스트 동물 항체 (s) 종 생성 보조 항체. 예를 들어 감소를 마우스 항체 동물 건강의 다른 마우스 레이즈 안티 마우스 이차 항체. 염소, 당나귀, 토끼는 통용되는 호스트 종 생산 보조 항체.
가장 일반적인 유형 이차 항체는 그 생성 대한 합동한 인구 면역 에서 대상 종.
예를 들어 예방 접종으로 염소 정화 마우스 IgG 생성합니다 염소 안티 마우스 IgG 항체를 묶을 것입니다 모든 수업 무거운 빛 체인 (H L) 및 조각 마우스 IgG 아니라 다른 분자 공유 엄격하게 보존 도메인 (e.g., igM 공유 같은 카파 라이트 고리에 IgG).
반대로 예방 접종으로 염소 만 마우스 IgG1 항체를 생성합니다 특정한 마우스 IgG1 항체 분자의 공유 엄격히 보존 도메인.
때문에 높은 보존 구조에 많은 면역 글로불린 도메인을 클래스 특정 보조 항체 있어야합니다 친화력 정화 크로스 adsorbed 달성하기 최소 크로스 반응 다른 면역.
고정형 마우스 IgG1 항체는 정화 모든 염소 항체의 바인딩 마우스 IgG1 사용하여 위의. 통로 통해 chromatography 컬럼 개 포함 마우스 IgG2a, IgG2b, IgG3, IgM 등 것이라고 구체화 이 마우스 IgG1 항체를 제거하는 크로스 반응 항체를 가진 non-IgG1 isotypes.
또한 통과하는 열 포함 고정형 세럼 단백질 에서 종 이외의 사용 면역 호스트 더 정화 이차 항체. 방법을 크로스 흡착 (종종 "매우 크로스 Adsorbed") 추가 정화 단계 권장 응용 때 기본 항체를 여러 종 때 면역 또는 다른 세럼 단백질 수 존재하는 샘플 프로브.
제어 제품
| 항체 | 신청 |
| 토끼 IgG | 용 immunodiagnostic: ELISA, LFA, CLIA |
| 마우스 IgG | |
| 마우스 IgM | |
| 치킨 IgY | |
| 염소 안티 마우스 IgG | |
| 염소 안티 토끼 IgG | |
| 염소 안티 치킨 IgY | |
| 마우스 안티 인간 IgG |
Isotype 제어
주요 목적은 isotype 제어 결정하는 것을 바인딩 기본 항체는 특정 오히려 일반적인 Fc 수용체 또는 상호 다른 단백질. 또한 바인딩 항체 경쟁력있는 수행 동일한 기능 기능 차단 항체.
The isotype 제어 한다 완전히 일관됩니다 소스 기본 항체, Ig 입력, 및 라벨.
정상적인 세럼 사용할 부정적인 제어 면역 라벨링 경우 기본 항체는 polyclonal. 때문에 다른 소스 fluorescently 표시 mab, 레이블 mab 같은 소스 사용해야합니다 isotype 제어 조정 배경 얼룩. 예: 예 경우 기본 항체는 마우스 안티 쥐 CD11b 및 복제 황소 42 정화 IgG, 그것의 isotype is 마우스 IgG2a, 그래서 정화 마우스 IgG2a 사용할 수 isotype 제어 또는 황소 42.
Isotype 제어: 같은 면역 글로불린 subclass as Moab in unimmunized 마우스, 요인에 휴대 autofluorescence, FC 수용체 중재한 항체 바인딩 비 특정 항체 바인딩 주로 간주됩니다. 경우 직접 면역 얼룩 사용됩니다, isotype 제어 또한 표시 형광 안료, 같은 IgG1 FITC, IgG2a PE 등. 또한 isotype 제어 및 Moab 표지 fluorochrome 농도 F:P 비율 (비율 표시 fluorochrome to 면역 글로불린 분자) 같은 최고의, 중요 정확한 설정 부정적인 긍정적 휴대 명소 의미. 마십시오 사용 isotype 제어 일치하지 모압, 바람직하게는 제품 준비 같은 실험실 동일한 프로세스 또는 방법 (같은 브랜드).
Isotype 제어 흐름 Cytometry
팹 파편 항체 를 세포 표면 낮은 친화력과 비 특이성, 특히 휴대 죽은 또는 막 손상; 이 특정 바인딩 더 분명합니다. 따라서 isotype 제어 종종 실험을 결정하는 배경 형광.
The isotype 제어 사용 될 클래식 마이너스 참조 흐름 cytometry. 달성하기 동일한 반응성 사이 isotype 제어 및 항체, isotype, 종 fluorescein, fluorescein 단백질 비율, 농도 및 다른 표시기 일치해야합니다.
경고:
1. 경우 항원 표현은 a bimodal 배포, 부정적인 긍정적 봉우리 분리, 실험 결과는 이해할 통해 bimodal.
2. 경우 교양 세포는 검출 할, 다음 설정 isotype 제어 현재 수 얻을 정보를 반영하는 셀 접착 능력 및 얻기 어려울 정보 반영 비 특정 형광. 따라서 설정 위로 isotype 제어 감지 교양 셀 이상적이지 않습니다.
3. 경우 다양한 fluorescein 사용됩니다 실험 동시에 분석에서, 그것은 발견 형광 누설 상당한 영향을 결과 배경 형광 않습니다 명백한, 적합하지 설정 isotype 제어. 좋은. (FMO 컨트롤은 셀 같은 종 스테인드 다른 모든 fluoresceins 한 fluorescein 제거 그래서 누설 다양한 fluoresceins 수 레이블 채널은 나타납니다 및 게이트 둘 장소, 그래서 필요한 제어 게이팅. 및 FMO 제어 만 중요한 때 에센셜 구별하는 긍정적이고 부정적인 정확하게. FMO 제어 지금 일반적으로 다색 실험 필요한 다색 실험.)
4. 때 isotype 제어, 발견 비 특정 바인딩 레벨 매우 높은 모르다 때문에 바인딩 비 특정 Fc 엔드 세포, 결과로 일반적인 신호, 주의 Fc 차단.
5. 그것은 이해하는 isotype 제어 만 참조 있도록 필터 일부 요인 영향을 실험 그러나 입사광에서 긍정적이고 부정적인 컷오프 포인트 또는 게이트 기반으로. 우리는 알고 isotype 제어 반영 배경 형광 비 특정 바인딩 배경 형광 또한 기인한 다른 요인 같은 autofluorescence, 높은 보상, 항체 라벨 방법 악기 다른 시약 또는 데이터 분석 및 다른 원인은 배경 형광.
6. 그것은 적정 대상 항체 줄이기 배경 형광 비 특정 바인딩 그리고 적당한 설정 isotype. 때문에 과도한 양의 항체의 네거티브 피크 시프트 및베이스 확장 발생합니다.
7. 경우 세포 신호 및 cytokines 검출됩니다 실험에서 the FMO 제어 및 부정적인 생물 제어 설정해야합니다, 지불 특별한주의와 unstimulated 셀 또는 셀 처리 인산화 억제물입니다.
8. 셀 생존 염료 추가 멀티 컬러 구성표 데드. 때문에 일반적인 얼룩 셀 죽인 극단적이다 제거되지 않은 경우, 그것은 높은 비 특정 바인딩 영향을 실험.
9. 그것은 세트 다른 제어 외에 isotype 제어 다른. 예를 들어 unstained 셀 결정합니다 부정적인 제어 배경 및 autofluorescence, 세트 PMT 전압;
완전히 스테인드 셀 결정합니다 약간 떨어져 축 이벤트 세트 PMT 전압; 단일 스테인드 셀/마이크로 조정 보상; unstimulated 또는 치료되지 샘플 실험 부정적인 제어 포지티브 셀 (자극 또는 처리 특히 마약) 포지티브 실용적인.
